Belirli bir miktarda saf kimyasal bileşiğin uygun bir çözücü içinde çözülmesiyle bir referans çözeltisi hazırlanır. Bu çözeltinin konsantrasyonu gravimetri, titrasyon veya spektroskopi gibi analitik yöntemler kullanılarak kesin olarak belirlenir.
Bu ne için ?
Referans çözeltisi, bilinmeyen numune üzerinde ölçümler yapılmadan önce spektrofotometreyi kalibre etmek için kullanılır. Spektrofotometre, ışığın farklı dalga boylarındaki iletimini veya emilimini ölçerek, referans çözeltinin konsantrasyonunu ölçülen absorbansla ilişkilendiren bir kalibrasyon eğrisi oluşturur. Bu eğri daha sonra ölçülen absorbanstan numunedeki bilinmeyen maddenin konsantrasyonunu belirlemek için kullanılır.
Referans çözümü sayesinde spektrofotometride hassas ve tekrarlanabilir ölçümler elde etmek mümkündür. Fiziksel bir miktarı (absorbans), biyokimya, farmakoloji, çevre araştırmaları ve gıda endüstrisi gibi birçok bilimsel ve endüstriyel alanda gerekli olan bir kimyasal maddenin konsantrasyonuna dönüştürür.
Örnek:
Örneğin biyolojik bir çözeltideki bir proteinin konsantrasyonunun belirlenmesini ele alalım. Bu proteinin bilinen konsantrasyonunu içeren bir referans solüsyonu hazırlanır ve spektrofotometreyi kalibre etmek için kullanılır. Daha sonra bilinmeyen çözeltinin absorbansı aynı spektrofotometre kullanılarak ölçülür. Referans solüsyonu ile oluşturulan kalibrasyon eğrisi kullanılarak numunedeki proteinin konsantrasyonu kesin olarak belirlenebilir.
Referans solüsyonlarının hassas tartım ve seyreltme teknikleri kullanılarak dikkatli bir şekilde hazırlanması gerektiğini belirtmek önemlidir. Ayrıca zamanla konsantrasyonlarının değişmesini önlemek için bunları doğru bir şekilde saklamak gerekir.
Kaynaklar:
– FÖPPEL, M.; HARMS, J.; KINE, JF Aktif karbon ve zirkonyum fosfat üzerinde zenginleştirme sonrasında demirin potasyum tiyosiyanatla spektrofotometrik tespiti. Mikrochimica Acta, c. 135, n. 1-2, s. 59–67, 2000.
– LUEKE, N. Spektrofotometrik Ölçüm Çiftleri: 4. Kalibrasyon Eğrisi. Uygulamalı Spektroskopi Dergisi, v. 47, n. 2, s. 155–161, 1987.
– 20 Eylül 2022'de erişildi.
